柱層析怎么裝柱，注意事項有哪些（氰霜唑） | （除草安全劑） | 旗

告訴你柱層析怎么裝柱以及使用柱層析時需要留神的事項。柱層析技術(chromatography)又稱柱色譜技術，主要原理是根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同，經(jīng)多次反復分配將組分分離開來。

柱層析怎么裝柱

裝柱辦法分為濕法和干法，一般來說，濕法裝柱的效果優(yōu)于干法裝柱。

1、濕法裝柱：

先將柱層析的填料活化處理后浸潤在合適的有機溶劑中，使之處于有機環(huán)境。裝柱時在層析柱自下而上依次填入硅烷花玻璃棉→石英砂→已處理康復的層析填料，一邊裝柱一邊用洗耳球輕輕敲打，使填料緊實，然后打開旋塞放掉多余的有機溶劑即可進行樣品剖析。

2、干法裝柱：

現(xiàn)在層析柱內(nèi)填入硅烷花玻璃棉，然后用不同極性的有機溶劑對層析柱的內(nèi)壁進行充沛潤洗，待層析柱晾干，依次填入石英砂及各種層析填料，同樣，一邊裝柱一邊用洗耳球輕輕敲打，使填料緊實，然后加入一定量的有機溶劑淋洗填康復的柱子，一般這個體積為柱子死體積的2倍。然后打開旋塞使淋洗液流出，即可進行樣品剖析。

填料緊實是保證層析柱柱效的關鍵，一定要留神。

層析柱最下層的棉花，我們一般是用硅烷花玻璃棉的，在馬弗爐中活化即可用。如果用脫脂棉，需要用二氯甲烷抽提3遍以去除雜質(zhì)，以防干擾實驗。

柱層析留神事項

（1）、裝柱前要仔細看填料的使用闡明書，每種填料都有自己的特性，以及特殊的裝柱辦法，針對不同的空柱，也要留神辦法可能不同；

（2）、填料要加水攪拌成平均懸液，懸液濃度依填料而不同，一般70－85%，迅速倒入空柱內(nèi)，或吸或壓，流速和具體步驟看闡明書。

（3）、所有柱子盡量做到填料平均，尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后，可用柱效測定的辦法檢查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔板高度應是填料平均粒徑的2－4倍，在此范圍內(nèi)越小越康復。

（4）、選擇合適的泵，首先是流速滿足要求，脈沖盡量小。首選柱塞泵。

（5）、準備上柱的液體應進行過濾，至少是0。45micrometre。

（6）、關于純化，首先要考慮的是你的目標：純度、數(shù)量、速度、收率等等，再根據(jù)樣品的具體情況，尤其是目標蛋白的性質(zhì)，確定純化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。第一步先從大量或復雜樣品中將目標蛋白“抓出”與主要雜質(zhì)分離；再用高選擇性的層析去除絕大局部雜質(zhì)；最后精密純化，提供純度至設定目標。到實際工作中，不要死靠三步，也許一步也許四步或更多，具體情況具體剖析。

（7）、至于測序，我想大略不到1mg應該足夠了。