親和色譜的原理是什么（甲氧胺鹽酸鹽），有哪些（氰霜唑）影響因素 | 新材

告訴你親和色譜的原理以及相關(guān)影響因素。什么是親和色譜？親和色譜也稱為親和層析，是一種利用固定相的聯(lián)合特性來(lái)分離分子的色譜辦法。親和色譜在凝膠過(guò)濾色譜柱上連貫與待分離的物質(zhì)有一定聯(lián)合能力的分子，并且它們的聯(lián)合是可逆的，在扭轉(zhuǎn)流動(dòng)相條件時(shí)二者還能相互分離。親和色譜能夠用來(lái)從混合物中純化或濃縮某一分子，也能夠用來(lái)去處或減少混合物中某一分子的含量。

親和色譜的原理

將一對(duì)能可逆聯(lián)合和解離生物分子的一方作為配基（也稱為配體），與具有大孔徑、親水性的固相載體相偶聯(lián)、制成專一的親和吸附劑，再用此親和吸附劑填充色譜柱，當(dāng)含有被分離物質(zhì)的混合物隨著流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱時(shí)，親和吸附劑上的配基就有選擇地吸附能與其聯(lián)合的物質(zhì)，而其他的蛋白質(zhì)及雜質(zhì)不被吸附，從色譜柱中流出，使用適當(dāng)?shù)木彌_液使被分離物質(zhì)與配基解吸附，即可獲得純化的目標(biāo)產(chǎn)物。

親和色譜的影響因素

1、上樣體積

若目標(biāo)產(chǎn)物與配基的聯(lián)合作用較強(qiáng)，上樣體積對(duì)親和色譜效果影響較小。若二者間聯(lián)合力較弱，樣品濃度要高一些，上樣量不要超過(guò)色譜柱載量的5%~10%。

2、柱長(zhǎng)

親和柱的長(zhǎng)度需要根據(jù)親和介質(zhì)的性質(zhì)確定。如果親和介質(zhì)的載量高，與目標(biāo)產(chǎn)物（目標(biāo)物）的作用力強(qiáng)，能夠選擇較短的珠子（柱子）；相反，則應(yīng)該增加柱子的長(zhǎng)度，保證目標(biāo)產(chǎn)物與親和介質(zhì)有充沛的作用工夫。

3、流速

親和吸附時(shí)目標(biāo)產(chǎn)物與配基之間達(dá)到聯(lián)合反應(yīng)均衡需要一個(gè)遲緩的過(guò)程。因此，樣品上柱的流速應(yīng)盡量的慢，保證目標(biāo)產(chǎn)物與配基之間有充沛的工夫聯(lián)合，尤其是二者間聯(lián)合力弱和樣品濃度過(guò)高時(shí)。

4、溫度

溫度效應(yīng)在親和色譜中比擬重要，親和介質(zhì)的吸附能力受溫度影響，能夠利用不同的溫度進(jìn)行吸附和洗脫。一般情況下親和介質(zhì)的吸附能力隨溫度的升高而下降，因此在上樣時(shí)可選擇較低的溫度，使待分離物質(zhì)與配基有較大的親和力，充沛地聯(lián)合；而在洗脫時(shí)刻采用較高的溫度，使待分離物質(zhì)與配基的親和力下降，便于待分離物質(zhì)從配基上脫落。例如，一般選擇在4℃進(jìn)行吸附，25℃下進(jìn)行解吸。