農藥中間體合成核酸檢測技術及優點 | | 旗凱
為你介紹艾滋病核酸檢測技術以及優點，有些人認為艾滋病既然無法治愈，查出來也沒用，不愿進行核酸檢測。實際上，早期診斷、早期治療不僅有利于延緩病情發展，提高生活質量，還可及時愛護他人免受感染，有利于艾滋病的控制。
艾滋病核酸檢測
艾滋病核酸檢測，直擊艾滋病病毒的RNA或DNA結構，檢測血液中是否存在病毒核酸，診斷有無病原體感染。采用PCR技術，使用分子生物學實驗室通用的擴增試劑和自行研究開發設計的復合引物，復蓋常見的HIV毒株，具有很高的靈活度。使用二次擴增的套式PCR擴增辦法，提高檢測的特異性，降低假陽性的概率。
核酸檢測將艾滋病病毒的檢測窗口期縮短至11天，并且核酸檢測這項技術目前可將乙肝、丙肝病毒的檢測“窗口期”分別由原來的50天、72天縮短到25天、59天。
艾滋病核酸檢測技術
HIV基因結構
HIV基因組由兩條單鏈RNA組成，每個RNA基因組約為9.7k，在RNA5′端有一帽結構（m7G5ppp5′GmpNp），3′端有poly（A）尾巴。HIV的主要基因結構和組合模式與其他反轉錄病毒雷同，均由5′末端長重復（long terminal repeat，LTR）、結構蛋白編碼區（gag）、蛋白酶編碼區（pro）、具有多種酶活性的蛋白編碼區（pol）、外膜蛋白（env）和3′末端的長重復LTR區組成。
核酸提取均采用磁珠法。
1）磁珠提取的原理：
將磁珠上標記特異性吸附核酸的物質特異性吸附核酸，并通過磁分離技術將病毒核酸從裂解液中提取出來。
2）步驟：
裂解—吸附—洗滌—洗滌—洗滌—洗脫
3）優點：
a.磁珠提取特異性高，受標本因素影響小，靈活度高
b.易于實現自動化
4)毛病：
a.老本較高、并需要一定的儀器(半自動、全自動)。
b.完全手工工作，工作量太大。
應用套式聚合酶鏈反應(nPCR)檢測技術
根據HIV-1 gag.pol和env基因序列設計了套式聚合酶鏈反應(nesled polymerasechain reaction，nPCR)引物。將外周血單個核細胞裂解液先用外側引物擴增，其產物再經內側引物擴增，直接走凝膠電泳判定結果。nPCR的敏感性。較常規PCR高100～1000倍，可檢測到0.5fg質粒DNA和50μ1HIV-1感染者外周血樣中的HIV基因。
根據專業文獻記載，用本法檢測63名HIV-1感染者全為陽性，而61名健康人和可疑者均為陰性，后者經追蹤檢測抗體排除了HIV-1感染。
由此可知，nPCR是一種敏感性極高、特異性很強、操作簡便易行的HIV-1基因檢測技術。它已經在早期診斷和外周血病毒含量檢測中發揮了重要作用，而且有著更廣大的應用前景。
艾滋病核酸檢測的優點
人體感染艾滋病病毒后，一般需要2-12周，平均42天左右血液中才可檢測到HIV抗體。在這段時期內，常規檢測技術基本無法檢測出HIV病毒，這就是常說的“HIV窗口期”。“窗口期”的存在，也解釋了為什么一些病人在接受了正規醫院輸血后卻感染艾滋病的起因。
在感染過程中，首先出現的是病毒RNA，這時能夠用PCR的辦法檢測出來，之后出現的是IgM抗體，使用雙抗原夾心法即能夠檢測出來，然后出現的是IgG抗體，使用間接法能夠檢測出來。
現在省市疾病控制中心和檢測試紙，使用的檢測辦法都是檢測抗體抗原，無法避免“HIV窗口期”因素的干擾。所以說，常規檢測技術在HIV窗口期內存在重大缺陷。
責任編輯：qxl
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